一、正确选择吸头
匹配移液器型号
单道移液器:对于艾本德常见的单道移液器,应选择标准T.I.P.S.系列吸头。例如,当使用 0.5-10μL移液器时,搭配相应规格的标准T.I.P.S.10μL吸头,能确保吸头与移液器紧密契合,保证移液的准确性和密封性。
多道移液器:若使用艾本德8道或12道多道移液器,优先选用ep Dualfit 8/12通道吸头。以艾本德12道移液器为例,使用ep Dualfit 12通道吸头,可使每个通道的吸液和排液操作保持一致,避免因吸头不匹配导致的移液量差异。
依据样本特性选择
高粘度液体:当移取如甘油等高粘度液体时,普通吸头可能导致吸液困难和流速过慢。此时应选用大口径吸头,如5mL规格的大口径吸头,相比普通吸头,其流速可提升40%,能更顺畅地移取高粘度液体,确保移液量的准确性。
挥发性试剂:对于乙醇、丙酮等挥发性试剂,为防止蒸汽进入移液器腐蚀活塞,必须使用带滤芯的吸头。艾本德的滤芯吸头,如ep Dualfilter T.I.P.S双滤芯吸头,可有效阻隔挥发性蒸汽,保护移液器内部结构,同时也能防止样品间的交叉污染。
灭菌需求:在细胞实验等对无菌环境要求很高的实验中,需使用预灭菌吸头。艾本德的预灭菌吸头通常采用灭菌袋包装,并内置COA证书,确保吸头在使用前处于无菌状态,满足细胞实验等对无菌操作的严格要求。
容量匹配原则
建议移液量在吸头标称容量的10%-100%之间。例如,移取0.5-10μL样本时,选择10μL吸头,其最小精确移液量可达0.2μL,能保证在该容量范围内的移液精度;对于100-1000μL样本,则使用1000μL吸头,并且在某些情况下,如移取高粘度或易挥发液体时,采用反向移液模式可进一步提升精度。
二、吸头的安装与使用
安装方法
单道移液器吸头安装:将移液器末端垂直插入吸头,轻轻下压并旋转15°左右进行锁定,确保吸头安装牢固。注意切勿上下或左右敲击,以免损坏移液器的吸头连接部位或导致吸头安装不紧密,影响移液准确性。例如,在使用Research®plus单道移液器时,规范的安装操作可使吸头与移液器紧密贴合,防止漏液现象发生。
多道移液器吸头安装:将移液器的第一道对准第一个吸头,轻压上紧。以艾本德8道移液器为例,安装时需确保所有8个吸头都与移液器对应通道紧密连接,同样不可进行敲击等不当操作。安装完成后,可通过轻轻提拉吸头,检查其是否安装牢固。
吸液操作
吸液深度:吸液时,将吸头垂直浸入液体,一般浸入深度约为1-3毫米。对于不同容量的吸头,浸入深度也有所差异,如10μL吸头浸入深度约1-2毫米,1000μL吸头浸入深度可适当增加至2-3毫米。过深可能吸入气泡或导致吸液量不准确,过浅则可能吸液不足。
吸液速度:吸液时应缓慢平稳操作,避免快速吸液。快速吸液容易导致液体飞溅、产生气泡,影响移液准确性。特别是在移取微量液体(如0.5μL以下)时,更要注意吸液速度,防止气泡的产生,因为微量液体中即使微小的气泡也会显著影响移液精度。
预润洗吸头:在移取蛋白质类样本或高粘度、易挥发液体时,建议进行3次预润洗。例如,移取细胞裂解液等高粘度液体前,先用吸头吸取少量液体,排出后再重复操作2-3次,这样可使吸头内壁形成一层液体膜,减少后续移液时的液体残留,提高回收率。对于易挥发液体,预润洗吸头5次以上,可平衡吸头内部的蒸汽压力,减少因挥发导致的体积误差。
排液操作
排液角度:分液时,吸头可轻微倾斜(10°-20°),使液体贴着容器内壁流出,减少飞溅。例如,在向试管中排液时,将吸头倾斜一定角度,可让液体沿试管壁缓慢流下,避免液体溅出试管外,造成样品损失或污染实验环境。
排液方式:一般情况下,先将移液器按钮按到第一档,打出大部分液体,再按下第二档,将余液排出。对于一些特殊液体,如粘稠液体,可能需要在第一档排出大部分液体后,停顿片刻,再按下第二档排尽余液,以确保吸头内液体排出。
三、吸头的维护与保养
日常清洁
每次使用后,应及时清洁吸头。若吸头仅接触普通水溶液等无污染液体,可用去离子水冲洗,然后用纯净水漂洗干净,自然晾干或放入烘箱中低温烘干(温度一般不超过60℃)。若吸头接触了蛋白质、细胞等生物样品或有机试剂等,需用适当的溶剂清洗。例如,接触蛋白质样品的吸头,可先用含有蛋白酶的清洗液浸泡一段时间,再用清水冲洗;接触有机试剂的吸头,可用相应的有机溶剂(如乙醇、丙酮等)冲洗,但要注意避免使用强酸、强碱等腐蚀性溶剂,以免损坏吸头。
对于移液器与吸头连接的部位,如移液器锥套,也需定期清洁。若出现卡顿现象,可用75%乙醇擦拭,但不可使用有机溶剂,防止对移液器表面造成损伤。
存储条件
吸头应避光保存于15-25℃的环境中,湿度<65%RH。过高的温度和湿度可能导致吸头变形、材质老化,影响其使用性能。例如,在高温高湿的环境下,吸头可能会变软,与移液器的连接密封性变差;而在过于干燥的环境中,吸头可能变脆,容易折断。
未使用的吸头应保存在原包装中,避免灰尘等杂质污染。对于已开封但未使用完的吸头,应及时密封包装,防止其受到外界污染。
定期检查
定期检查吸头是否有损坏、变形等情况。例如,每次使用前,仔细观察吸头是否有裂缝、缺口,若发现吸头损坏,应立即丢弃,不可继续使用,以免影响移液准确性或导致液体泄漏。
检查吸头与移液器的适配性。随着移液器的使用,其吸头连接部位可能会出现磨损,影响与吸头的连接紧密性。因此,需定期检查吸头安装后是否牢固,有无松动迹象,如有问题,应及时对移液器进行维修或更换相关部件。
四、常见问题及解决方案
吸头安装不牢固
可能原因:吸头尺寸不匹配,移液器吸头口磨损或污染。
解决方案:使用匹配型号的吸头,仔细核对吸头包装上标注的适用移液器型号。清洁移液器吸头连接口,可使用干净的无纤维布蘸取75%乙醇擦拭。若吸头口磨损严重,应联系专业维修人员对移液器进行维修或更换损坏部件。
吸头内出现气泡
可能原因:吸液速度过快,吸头未浸入液体中。
解决方案:减慢吸液速度,平稳操作移液器按钮。确保吸头正确插入液体中,保持规定的浸入深度(1-3毫米)。若吸头内已产生气泡,可将吸头从液体中取出,垂直向上,轻轻弹击吸头外壁,使气泡上升至顶部,然后将吸头重新插入液体中,缓慢释放按钮,重新吸取液体。
液体进入移液器内部
可能原因:活塞释放过快,导致液体回流;移液器倾斜或倒置。
解决方案:立即停止使用该移液器,拆解移液器,清洁内部组件。在操作过程中,避免倾斜或倒置移液器,缓慢释放活塞,防止液体回流。若液体已进入移液器内部且造成了腐蚀等损坏,应及时联系艾本德售后人员进行维修,不可自行尝试修复,以免造成更严重的损坏。
移液不准确或重复性差
可能原因:体积调节不正确,移液器内部活塞或密封圈磨损,吸头未正确安装。
解决方案:检查并重新设置体积,确保移液器体积调节至所需值。更换吸头,选择质量可靠且适配的吸头,并正确安装。对移液器进行维护,检查活塞和密封圈的磨损情况,必要时更换密封圈或活塞。若移液器仍无法正常移液,可将其送至专业校准机构进行校准和维修。
吸头吸取液体困难
可能原因:吸头堵塞,液体粘度太高。
解决方案:检查吸头是否堵塞,若有堵塞物,可尝试用细针等工具小心清理,若无法清理干净,则更换新的吸头。对于高粘度液体,选择大口径吸头或采用反向移液操作技术。反向移液操作时,先将按钮按到第二档再缓慢释放完成吸液,这样会多吸入一些液体,打出液体时只要按到第一档即可,多余液体可补偿吸头内部的表面吸附,以弥补体积偏差。
正确使用和维护艾本德吸头,不仅能确保实验操作的顺利进行,提高实验结果的准确性,还能延长吸头和移液器的使用寿命,降低实验成本。实验室操作人员应严格按照上述要点进行操作,及时解决常见问题,为实验工作的成功开展提供有力保障。