一、产品概述
贝克曼Agencourt核酸提取与纯化试剂是专为高通量、高效率提取高质量核酸（DNA/RNA）设计的系列产品，适用于血液、组织、细胞、病毒等多种样本类型，广泛应用于二代测序（NGS）、PCR扩增、基因分型等分子生物学实验。其核心优势在于结合磁珠法或离心柱法技术，实现快速、低残留的核酸纯化，适配自动化平台（如Biomek系列工作站），提升实验通量与重复性。
二、使用前准备
1. 试剂储存与检查
储存条件：严格按说明书要求保存（通常磁珠法试剂需2-8℃避光，部分冻干组分需-20℃保存）；避免反复冻融（尤其是酶类或磁珠悬液）。
有效期与完整性：使用前核对试剂盒有效期，检查包装是否破损、试剂是否泄漏或变色（如磁珠悬液出现沉淀需充分混匀后再用）。
2. 实验环境与耗材
环境：在洁净实验室（推荐超净台或生物安全柜）操作，避免核酸酶污染（使用无核酸酶的离心管、吸头及水）。
耗材适配性：确保使用试剂盒配套的耗材（如特定规格的96孔板、磁力架或离心柱），避免因兼容性问题影响结合效率。
三、操作流程（以磁珠法为例）
1. 样本裂解
根据样本类型选择预处理方案（如血液样本需裂解红细胞，组织样本需机械或酶解破碎细胞），确保核酸充分释放。
加入裂解液后，按说明书控制孵育时间与温度（如室温裂解10分钟或56℃加热15分钟），促进细胞膜破裂。
2. 核酸结合
向裂解产物中加入磁珠悬液（磁珠表面修饰有核酸亲和基团），轻柔混匀（避免剧烈震荡导致磁珠团聚），室温孵育5-10分钟，使核酸与磁珠充分结合。
关键点：孵育时间需严格控制，过短可能导致结合不wan全，过长可能引入非特异性吸附。
3. 磁珠捕获与洗涤
将反应体系置于磁力架上（或使用配套磁力模块），静置1-2分钟至磁珠聚集，弃上清（去除蛋白质、盐离子等杂质）。
加入洗涤液（通常含乙醇或低盐缓冲液），轻柔重悬磁珠后再次磁分离，重复洗涤2-3次（洗涤次数和体积需按说明书优化，避免过度洗涤导致核酸损失）。
4. 核酸洗脱
弃最后一次洗涤液后，加入预热的洗脱缓冲液（通常为无核酸酶水或TE缓冲液，温度建议50-70℃以增强洗脱效率），轻柔混匀后室温孵育2-5分钟。
再次磁分离，转移上清液（含高纯度核酸）至新管，避免吸到磁珠。
四、关键注意事项
1. 操作规范
防污染：全程佩戴手套，使用无核酸酶耗材；避免交叉污染（如不同样本间需更换吸头，磁力架需定期用75%乙醇擦拭）。
动作轻柔：磁珠结合与洗涤时避免剧烈涡旋或吹打，防止磁珠破碎或核酸断裂。
2. 质量控制
浓度与纯度检测：使用分光光度计（如NanoDrop）或荧光定量仪（如Qubit）检测核酸浓度（A260/A280比值DNA应在1.7-1.9，RNA应在1.8-2.0）；通过琼脂糖凝胶电泳观察条带完整性（无拖尾或降解）。
对照设置：每批次实验建议设置阳性对照（已知浓度核酸样本）和阴性对照（无模板样本），验证提取效率与特异性。
3. 常见问题处理
核酸产量低：检查样本起始量是否足够、裂解是否充分（如血液样本需确保红细胞wan全裂解）；优化洗涤次数（减少过度洗涤）。
纯度异常（A260/A280偏低）：可能残留蛋白质，增加酚-氯法预处理或延长洗涤时间（使用高盐洗涤液）。
自动化平台故障：检查磁力架吸附强度、移液体积准确性，确保试剂温度符合要求（如洗脱缓冲液需预热）。
4. 废弃物处理
含生物危害样本的耗材（如裂解产物、洗涤液）需按实验室生物安全等级处理（高压灭菌或化学消毒）；废弃磁珠按一般固体废弃物处置（若含危险化学品需特殊处理）。
五、总结
贝克曼Agencourt核酸提取试剂通过优化的磁珠结合与洗涤体系，可高效获得高纯度、高完整性的核酸，适配高通量实验需求。严格遵循操作规范、控制关键参数（如孵育时间、洗涤次数）并做好质控，是确保实验成功的关键。
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